Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐引入

从第一次用到肝细胞自身病原躯到用到1M-乳癌药理学腹泻的十分困难率在青少年末期就有很好的描述，多个肝细胞自身病原躯阳性的青少年中会有70%在人体内变换后10天内患病乳癌，而随访15年的青少年这一比例降低到84%。相比较之下，占总药理学1M-乳癌一半以上的M-1M-乳癌的得病机制还无法得到充分的研究。

越来越多的人开始运用于仍须系统来假设1M-乳癌的十分困难：变异在用到多种肝细胞自身病原躯时带入第1过渡阶段，用到肝细胞素所致时带入第2过渡阶段，用到腹泻时带入第3过渡阶段。一些多发肝细胞自身病原躯阳性的变异，在1期和2期，十分困难更慢，并其发展为得病的1M-乳癌。我们此前描述了组合成在首次检测到多种肝细胞自身病原躯样品后最少10年无乳癌的更慢十分困难者，这组病征人数少，但特征非常明确。随后，我们找到肝细胞自身上皮细胞特异性CD8+T酶质反应当在十分困难快速的病征中会基本不实际上，但在近期得病和长期以来实际上的乳癌病征中会很容易检测到。这可能得出结论，与十分困难病征相比较，这些病征自身特异性当的调节增强。

早期研究得出结论，尽管调节性T酶质(Treg)量正常，但乳癌病征实际上一些机能缺陷，其中会除此以外对IL-2的反应当控制能力降低。此外，乳癌病征中会的畸变CD4+T酶质可能对调节更具抵抗性，展现为畸变T酶质的依赖性弱化，共存产生的Treg和已逝躯产生的诱导Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T酶质中会IL-2反应当弱化。本研究的用以是描述了CD4+调节性T酶质(Treg)在一小群近乎快速十分困难者中会的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX研究是一项以人群为基础的侧向研究，在21岁表列确诊的病征子女中会检查1M-乳癌的危险状况。我们此前描述了长期以来快速十分困难者的特征，他们保持多重肝细胞自身病原躯阳性超过10年，但无法用到乳癌的药理学腹泻，更慢性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持无乳癌并愿意共享大量血清样品的快速十分困难者纳入T和B酶质机能分析。在目前的研究中会，8名更慢十分困难者(SP组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身病原躯阳性。所有的发起者都保持稳定1M-乳癌十分困难的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身病原躯对某些上皮细胞的阳性反应当，然而，一名病征早就保持稳定2期最少6年，但无法用到药理学腹泻，一名病征被诊断为乳癌，该患者72岁，在采集实验样品时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中会对该酪氨酸透过了单独评估。分离外周血单个反应当器酶质(PBMCs)，采用多参数流式酶质术和T酶质依赖性试验评估酪氨酸中会Treg的阈值、表M-和机能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究、表征和回归)透过无行政官员聚类分析，评估Treg表M-。

结果：与健康酪氨酸相比较，来自更慢十分困难躯的心灵CD4+T酶质的行政官员聚类推断，激已逝的心灵CD4+ Treg阈值降低，与糖皮质激素诱导的TNFR涉及酶(GITR)理解降低有关。一名HbA1c急剧下降的病征与十分困难快速者和匹配的样本相比较，Treg谱有所不同。机能分析得出结论，与健康酪氨酸相比较，来自快速十分困难躯的Treg依赖性的CD4+畸变T酶质依赖性相比损伤。展现为对畸变CD4+T酶质CD25和CD134理解的依赖性降低。

三幅1 深入的表M-分析推断，CD4+Treg亚M-在更慢十分困难队列中会降低。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的已逝CD4+CD45RA -酶质上。根据标示物理解深入研究出10个元簇:心灵T酶质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T酶质;HLA-DR + GITR +心灵T酶质;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个不同Treg标示生成的10个元簇的MST。每个节点推选一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在节点组周围上色。每个节点中会的饼三幅指出单个标示的理解档次。(b)每个元聚类的热三幅，以推断整躯标示理解。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于总质量为每个metacluster装入点阵三幅(总质量> 0.05%)确定为HD和SP组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T酶质(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T酶质(l)。深蓝色红色推选捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 运用于CITRUS的预测模M-证实，Treg阈值的降低是十分困难快速的字样。分级去极化(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP发起者和匹配的HD发起者在CD4+CD45RA−T酶质上的差异性。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的推选性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解透过分离，模拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组以及酪氨酸SP 606(深蓝色)中会CD25+ cd127的阈值统计三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去极化有界的装入点阵三幅;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度可视，箭头突出的簇被识别为SP和HD队列之间的不同。(j)装入点阵三幅推断了在SP(蓝点)和HD(灰点)组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对于总质量(比例)。(k)直方三幅推断每个簇的表M-(粉红色)和Treg标示相对于理解与背景理解(蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中会标示的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅3 与健康献血者相比较，十分困难快速者心灵treg的GITR降低。每个心灵CD4+T酶质元簇(心灵T酶质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T酶质;HLA-DR + GITR +心灵T酶质;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个理解标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热三幅(sp606不除此以外在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR理解结合，推断直方三幅(c)和统计三幅(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(深蓝色)所有酪氨酸除此以外，p< 0.05(蓝色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不除此以外在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR理解，从分级去极化，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(深蓝色)结合，推断直方三幅(e)和统计三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

三幅4 来自快速十分困难的CD4+ treg酶质控制畸变CD4+T酶质的控制能力降低。SP组用蓝色的直通和红色指出，HD组用红色的直通和红色指出，深蓝色的直通/红色指出酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T酶质透过分选。CD4+CD25−(应当答者)被标示为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化酶质，人才培养3紧接著透过流式酶质术检测。(a-d)与CD4+应当答者相对于应当的treg人才培养(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者人才培养。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。运用于阳性对照(激已逝的号召酶质不含treg)计算依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变CD4+T酶质对快速十分困难的T酶质已逝化的依赖性更敏感。SP组用蓝色的直通和红色指出，HD组用红色的直通和红色指出，深蓝色的直通/红色指出酪氨酸sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T酶质透过分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel标示，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠已逝化酶质，人才培养3紧接著透过流式酶质术(CD25反染)和酶质因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者主导人才培养。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性平均值(b)。(c,d) CD25依赖性平均值(c)和CD134依赖性平均值(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自快速十分困难子的已逝化心灵CD4+Treg在GITR理解中会得到了扩展和比较丰富，凸显了进一步研究Treg在1M-乳癌高风险变异中会的表征的有效性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28